实验八 延胡索的炮制及其煎液中的生物碱含量测定和镇痛试验

一、实验内容

1.醋煮法制备延胡索(或用醋炒延胡索)

2.延胡索煎液总生物碱含量测定

3.延胡索煎液镇痛试验

二、目的要求

    通过对延胡索炮制前后生物碱含量测定及镇痛试验,进而了解延胡索的炮制意义。

三、实验器材及药品

烧杯,电炉、分液漏斗、lOml容量瓶、回收装置、5ml刻度吸管、圆底烧瓶、碘瓶、碱式滴定管、注射器、秒表、计数器,氯仿、硫酸、氨水、无水硫酸钠、氢氧化钠、甲基红、溴甲酚绿、试纸、醋酸等。

四、实验方法

(一)炮制

1.延胡索  除去杂质,洗净,打碎成颗粒状,干燥。

2.醋延胡索  取净延胡索,加醋与适量水(平药面),用文火加热,煮至透心,水干时取出,捣碎成颗粒状,干燥。

延胡索每100kg,用醋20kg。

(二)总生物碱的含量测定

1.样液制备  精密称取延胡索、醋延胡索各10g,分别置于500ml烧杯中,加水(200ml、100ml)煎煮2次,每次微沸20分钟,用脱脂棉过滤,加氨水调至pHl0以上,移入250m1分液漏斗中,用氯仿萃取至无生物碱反应,合并萃取液,加20ml蒸馏水洗涤,再用5ml氯仿洗涤水层,合并氯仿。加无水硫酸钠3g脱水后,回收氯仿至小体积;转入10ml容量瓶中,加氯仿至刻度,备用。

2.含量测定  精密吸取上述样品液5ml,至100ml锥形瓶中水浴挥去氯仿,加氯仿2ml溶解残渣,加0.0l(mol/L)硫酸20ml,水浴挥去氯仿,加甲基红-溴甲酚绿指示剂2滴,用0.02(mol/L)氢氧化钠液滴定,终点由红色变为绿色(或以电位测定法指示终点,等当点为pH5.1)。

计算方法:总生物碱含量以延胡索乙素计。每毫升0.01(mol/L)硫酸溶液相当于7.1084mg乙素。

(三)镇痛试验——化学刺激法

1.样品液的制备  取延胡索生品及醋制品各25g,水煎煮2次(400ml,250m1)微沸25分钟,过滤,浓缩至100ml备用。

2.试验方法  取小鼠30只,体重18~22g(雄性)随机分为三组,对照组给予等体积生理盐水,给药组分别灌以上述样液0.6ml/只,40分钟后,各鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml/10g, 观察并记录15分钟内产生扭体反应的动物数或每组扭体反应的次数,与生理盐水组比较其镇痛效果。

五、注意事项

(1)水煎液因含淀粉而不易过滤,需用少量棉花过滤。

(2)萃取时出现乳化不易分层时,可用玻棒搅拌使其分层。

六、思考题

(1)延胡索的炮制方法有哪些?醋炙的原理,目的是什么?,

(2)延胡索总生物碱的含量测定有哪几种方法?

实验九  中药炮制前后煎出物的比较

一、实验内容

1.饮片不同厚度其煎出物含量的比较(甘草、黄芩)。

2.种子类炮制前后其煎出物含量的比较(王不留行、牵牛子)。

3.动物类炮制前后煎出物含量的比较(穿山甲、鸡内金)。

二、目的要求

通过对一些中药炮制前后煎出物含量比较,了解中药炮制的目的。

三、实验器材及药品

烧杯、扭力天平、分析天平、250ml三角瓶、冷凝管、吸管(25ml、lOOml)、瓷蒸发皿、布氏漏斗、抽滤瓶(300m1)、水浴锅、干燥器等。

四、实验方法

(一)供试品制备

1.饮片的切制  取黄芩、甘草按规定的方法切成不同厚度的饮片。

黄芩2mm;甘草2mm。

2.种子类和动物类药物分别按规定的方法炮制。

(二)水溶物测定

    分别取药材样品各约4g,称定重量(准确至0.01g),置250ml三角瓶中,精确加水lOOml,塞紧,称定重量(准确至0.01g),静置1小时后,连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1小时。放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3小时,移置干燥器中,冷却30分钟,迅速精密称定重量,计算供试品中含水溶性浸出物的百分数。

五、注意事项

(1)回流时注意控制火力,防止暴沸。

(2)吸取滤液时,不要搅拌,力求一次吸取。

六、思考题

    根据中药炮制前后煎出物含量测定结果,说明中药炮制的目的和意义。

实验十  煅法

一、实验内容

1.明煅法:明矾、石膏、龙骨。

2.煅淬法:自然铜、炉甘石、代赭石。

3.扣锅煅法:棕榈、血余、灯心。

4.自然铜煅制前后含铁量比较。

二、目的要求

(1)了解煅法的目的和意义。

(2)掌握三种煅制方法的操作要点及火候、注意事项和质量标准。

三、工具设备

1.煅制  炉子、铁铲、锅、坩锅、烧杯、量筒、火钳、电炉、大小瓷蒸发皿,搪瓷盘、台秤、马福炉,盐泥、米醋等。

2.含铁量测定  电炉、石棉网、250m1三角烧瓶、玻璃漏斗、量杯、酸式滴管、分析天平,活性炭、硫酸-磷酸混合液、0.5%二苯胺磺酸钠、0.05(mo1/L)重铬酸钾标准液等。

四 实验方法

(一)明煅法

1.明矾  取明矾除去杂质,筛或拭去浮灰,打碎,秤重,置于适宜的容器内,用武火加热,切勿搅拌,煅至水分完全蒸发,无气体放出,全部泡松,呈白色蜂窝状固体时,取出放凉,称重。

成品性状:本品呈洁白色,无光泽,蜂窝状块,体轻松,手捻易碎。

2.石膏  取净石膏块,称重,置适宜容器内或直接置火源上,用武火加热,煅至红透,取出放凉,碾细,秤重。

成品性状:本品煅后呈洁白色或粉白色条状或块状,表面松脆,易剥落,光泽消失,手捻 易碎。

3.龙骨  取净龙骨,敲成小块,称重,置适宜容器内,用武火加热,煅至红透,取出放凉,称重。

成品性状:本品呈灰白色或灰褐色,质酥脆,吸舌力强。

(二)煅淬法

1.自然铜  取净自然铜小块,置适宜容器内,用武火加热,煅至红透,取出后立即放入醋内浸淬,如此反复煅淬数次,至黑褐色,表面光泽消失并酥松,取出,摊凉。

自然铜每100kg,用米醋30kg。

成品性状;本品为不规则碎粒,灰黑色或黑褐色,质酥脆,无金属光泽。带醋气。

2.炉甘石  取净炉甘石,置适宜容器内,用武火加热,煅至红透,取出后立即倒入水中浸淬,搅拌,倾取混悬液,来透者沥干后再煅烧,反复浸淬2~3次。合并混悬液,静置,倾去上层清水,干燥研细。

成品性状:本品呈白色或灰白色的极细粉末。

3.代赭石  取净代赭石碎块,置适宜容器内或直接置火源上,用武火加热,煅至红透,取出后立即放入醋内浸淬,如此反复煅淬数次,直至酥脆,取出干燥,碾成细粉。

代赭石每lOOkg,用米醋30kg。

成品性状,本品呈暗褐色或紫褐色,光泽消失.略带醋气。

(三)扣锅煅法

1.棕榈  取净棕毛段或棕板块,置适宜容器内,上扣一较小容器,两容器结合处用盐泥封固,上压重物,并贴一块白纸条或大米数粒,先用文火加热,后用武火煅至白纸或大米呈深黄色时,停火,待凉后,取出。

成品性状,本品为黑褐色或黑色的块状或毛状物,有光泽。

2.血余  取头发除去杂质,反复用稀碱水洗去油垢,清水漂净,晒干,下与棕榈煅法同。

成品性状,本品为不规则的小块状,乌黑光亮,呈蜂窝状,研之清脆有声。质轻易碎,有不快的臭气。

3.灯心  取净灯心,扎成小把,下与棕榈煅法同。

成品性状:呈炭黑色,有光泽。质轻松,易碎。

(四)自然铜煅制前后含铁量的测定

    取生、煅自然铜粉末各3g精密秤定,置250ml三角烧瓶内,加水lOOml,煮沸25分钟,加入活性炭0.1g,继续煮沸1.0分钟,过滤。滤渣加水80ml,煮沸20分钟,过滤,合并滤液,加入硫酸-磷酸混合液15ml,0.5%二苯胺磺酸钠3滴,用0.05(mol/L)重铬酸钾标准液滴定至稳定的蓝紫色,即得。每1ml重铬酸钾溶液(0.Olmol/L)相当于3.351mg的铁。

五、注意事项

(1)煅明矾,中途不得停火,并切忌搅拌。

(2)煅淬药物火力要强,并要趁热淬之。

(3)扣锅煅的过程中如发现黄泥开裂漏气现象应及时补固。煅透后务须放冷方能打开。

(4)煅锅内药物不宜放得过多过紧,以容器的2/3为宜。

(5)煅制自然铜过程中,会产生硫的升华物或有毒的二氧化硫气体,故应在通风处操作。

(6)自然铜煎煮时宜用小火,并需不断搅拌,防止瓶底结块与爆溅。加活性炭时,应离火,以免引起爆沸。

(7)生自然铜溶液颜色较深,滴定时显黄色,影响终点观察,可再加混合酸15ml。

六、思考题

(1)实验中各药炮制目的是什么?

(2)煅制三法各有何特点?分别适合于哪类药材?

(3)用重铬酸钾法测定2价铁离子含量时,滴定前为什么要加入硫—磷混合酸?加入混合酸后为什么要立即滴定?

实验十一  中药炒炭前后止血作用的比较

一、实验内容

棕榈、地榆、槐米、大蓟等出血、凝血时间的测定。

二、目的要求

通过实验了解中药炒炭的目的和意义。

三、实验器材及药品

乳钵、电炉、剪刀,秒表、5ml注射器、小鼠灌胃器、兔开口器、导尿管,滤纸条,毛细管(Φlmm)、小砂轮、婴儿磅秤、天平;小鼠、家兔、生理盐水等。

四、实验方法

(一)药物炮制

棕榈按煅炭法锻制存性;地榆、槐米、大蓟按炒炭法炒炭存性。

(二)药液的制备

    称取生药和炭药100g,分别置1000ml烧杯中,加水400ml煎煮1小时,用纱布过滤,残渣加水20ml,再煎煮30分钟,纱布过滤,合并滤液浓缩至lOOml。

(三)出血时间测定

    取体重18~22g小鼠30只,随机分成3组,称重、标号。按0.8ml/20g剂量,分别将生药水煎液和炭药水煎液给两组小鼠灌胃。半小时后,剪去小鼠尾部3mm,每隔30秒,用滤纸轻轻吸去血滴,但不能挤压尾部,直至血流自然停止,用秒表记录出血时间。另以生理盐水组对照,对所得结果进行统计学处理,求得P值。

(四)凝血时间测定—毛细血管法

(1)取1.5~2.Okg的家兔,将兔左耳缘静脉用针刺破一处;待血液自行流出后,用内径为lmm的玻璃毛细管吸取血液,血液流出时开始记录时间,每隔30秒轻轻折断毛细管一段,若有血丝出现即为凝血。测定凝血时间后,家兔以20ml/g的剂量灌以药液,1小时后,再于右耳缘静脉取血,测定凝血时间,进行自身比较。

(2)取小鼠按上法分组,灌胃,30分钟后,用毛细管(Φlmm)于鼠眼球静脉取血,至管内血柱达5cm后取出,当血液进入毛细管时开始计时,每30秒轻轻折断毛细管一段,若有血丝出现即为凝血,测得凝血时间。另以生理盐水为对照组,所得结果进行统计学处理,求得 P值。

五、注意事项

(1)测定出血时间时,应将小鼠固定,并尽量使之保持安静。

(2)测定凝血时间时,要轻折毛细管。

六、思考题

中药炒炭的目的是什么?在临床上常用于治疗哪些疾病?

实验十二  蒸法

一、实验内容

1.蒸大黄、何首乌。

2.大黄炮制前后蒽醌类成分的含量比较。

二、目的要求

(1)了解蒸制的目的和意义,辅料的性质和作用。

(2)掌握蒸制的方法,程序、质量要求。

(3)通过大黄不同炮制品的成分含量比较,探讨大黄的炮制意义。

三、实验器材及药品

1.蒸制  蒸锅、搪瓷盘、台秤、烧杯、量筒、筛子、漏斗、纱布;黄酒、黑豆等。

2.大黄含量测定  分光光度计、小型索氏提取器、200ml及25ml容量瓶、250ml分液漏斗、lOOml磨口三角烧瓶、250ml三角烧瓶、冷凝器、水浴锅、刻度吸管,秤量瓶,1.8-二羟基蒽醌、15%氢氧化钠-2%氢氧化铵溶液、乙醚、氯仿、混合酸(10ml冰醋酸加2ml 25%盐酸)等。

四、实验方法

(一)蒸制

1.大黄  先将大黄切成小块,置于容器内,用黄酒拌匀,再装入砂锅中(或密闭容器内),锅口密闭,隔水加热。先用武火加热至圆气后用文火,蒸至酒被药物吸尽,大黄内外均呈黑褐色时,取出放凉,出罐,干燥。

大黄每lOOkg,用黄酒30kg。

成品性状:本品内外均呈黑褐色,略有清香气。

2.何首乌  取净何首片或块,置于容器内,用黑豆汁拌匀,再装入砂锅中(或密闭非铁质容器内),锅口密闭,隔水加热。先用武火加热至圆气后用文火,蒸至汁液吸尽并呈棕褐色时,取出放凉,出罐,干燥。

何首乌每lOOkg,用黑豆lOkg。

黑豆汁制法:取净黑豆加适量水,煮约2~3小时,滤汁,再加水煮2小时,滤汁,两次汁合并约是黑豆的3倍。

成品性状:本品表面呈棕黑色,质坚硬,断面角质样棕褐色或黑色。味微甘。

(二)含量测定

1.样品制备  取生、制大黄饮片,粉碎,过40目筛。

2.标准曲线的绘制  精密秤取25mg 1,8-二羟基蒽醌,置250ml容量瓶中,氯仿溶解并稀释至刻度。

    精密量取上述标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.OOml,分别放入25ml容量瓶中,在水浴上蒸去氯仿,加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液至刻度,摇匀,30分钟后在525nm处测定光密度,以混合碱液为空白对照,绘出光密度(A)-浓度(C)的曲线,并计算该曲线的回归方程。

3.大黄中游离蒽醌的测定精密秤取样品lOOmg,置索氏提取器中,以50ml氯仿回流提取至无色,氯仿提取液移入分液漏斗中,冷至室温,以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液萃取至无色,合并碱液,用少量氯仿洗涤,弃去氯仿,碱液调整至一定体积(250ml),若不澄清,可用垂熔漏斗过滤,溶液沸水浴中加热4分钟,用冷水冷却至室温(注意应补足原来体积),30分钟后在525nm处测定光密度(以混合碱为空白),由标准曲线所得浓度计算含量。

4.大黄中结合蒽醌的测定精密秤取样品lOOmg,加20ml混合酸(10ml冰醋酸加2m 25%盐酸)溶液于lOOml三角瓶中,回流水解1小时,冷后加入30ml氯仿,继续回流20分钟,氯仿提取液以滤纸过滤于分液漏斗中,药渣以10ml氯仿洗3次,洗液通过原滤纸过滤到分液漏斗中,用少量水洗涤氯仿,氯仿液用混合碱液同上萃取测定,测得含量为游离葸醌和结合葸醌总量。从中减去游离蒽醌含量,即得结合蒽醌含量。

计算公式

含量%=C×T/W ×100%

C:为游离葸醌的浓度(mg/ml)

F:为样品稀释度(即稀释倍数×原体积)

W:样品的干燥重量(mg)

五、注意事项

(1)蒸制时间必须从沸腾算起。蒸制过程中随时添加沸水,蒸好后要再闷一定时间。

(2)酒蒸要密闭,防止黄酒挥发。

(3)标准品与检品的发色时间应相同。

(4)萃取与比色操作应在无阳光直接照射下进行,碱萃取液应避光保存。

(5)与样品接触的仪器应干燥。

六、思考题

(1)蒸制药物应注意什么?意义何在?

(2)如要测定何首乌中的蒽醌类成分,可用何法进行?

实验十三  煮法

一、实验内容

1.煮草乌(或川乌)、远志

2.草乌(或川乌)炮制前后成分比较

二、目的要求

(1)了解煮制的目的和意义,辅料的性质和作用。

(2)掌握煮制的方法、程序、质量要求。

(3)通过草乌(或川乌)不同炮制品的成分比较探讨草乌(或川乌)的炮制意义。

三、实验器材及药品

1.煮制  铁锅(或小铜锅)、台秤,电炉、竹片、切药刀、量筒、瓷盘;甘草等。

2.草乌(或川乌)成分比较实验  250ml碘量瓶、250ml三角烧瓶、漏斗、量筒、水浴锅、称量瓶、微量注射器、回收装置、吹风机、喷雾器、层析缸、碱式滴定管、分析天平、硅胶板,乙醚、氯仿、氨试液、乌头碱、氢氧化钠标准液、硫酸标准液、缓冲液(pH7、pH3)、改良碘化铋钾试液、甲基红、中性乙醇等。

四、实验方法

(一)煮制

1.草乌(或川乌)  取净草乌,用水浸泡至内无干心(约2天,如有发霉要换水),取出,加水煮沸至大个及实心者切开内无白心,口尝微有麻舌感时(约煮2小时以上),取出,切成薄片,干燥,筛去碎屑。

成品性状:本品表面灰褐色或暗黄色,中心部色较浅呈灰色,周边黑褐色。味淡不麻舌或微有麻舌感。

2.远志  先将甘草片置锅内,加适量清水煮2次,过滤,弃去残渣,将滤液浓缩至适量,随即将净远志片投入药汁内加热煮沸后,改用文火,保持药液微沸,并勤加翻动,煮至药透水尽,略干,干燥。筛去碎屑。

远志片每100kg,用甘草6kg。

成品性状:本品味略甜,嚼之无刺喉感。

(二)草乌(或川乌)炮制前后成分比较

1.乌头碱的含量测定  取生、制草乌粗粉各约10g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加试液5ml使湿润,加乙醚-氯仿(3:1)混合液50ml,密塞,摇匀,放置过夜,滤过,药渣加混合液50ml,连续振摇l小时,滤过,药渣再用混合液洗涤3~4次,每次15ml,滤过,洗液与滤液合并,低温蒸干。残渣加混合液5ml使溶解并蒸千,再加乙醇5ml使溶解。精密加入硫酸液(0.01mol/L)15ml、水15ml与甲基红指示液3滴,用氢氧化钠液(0.02mol/L)滴定至黄色。每lml硫酸液(0.01mol/L)相当于12.9mg的乌头碱(C34H47N011)。制品含生物碱以乌头碱(C84H47NOll)计,不得少于0.20%。

2.草乌(或川乌)生物碱的纸层析

(1)样品液的制备:取生、制草乌粗粉各3g,精密称定,分别置碘量瓶中,加入氨试液5ml,待粉末润湿后,加乙醚80ml,振摇30分钟,放置3~4小时,用滤纸过滤于三角瓶中,药渣用15ml乙醚洗涤2次,合并醚液,低温回收乙醚,至约2~3ml,移入小玻璃瓶中,水浴蒸干,用0.5ml氯仿溶解。

(2)层析纸条的制备:取层析滤纸裁成20×4cm的长条,自纸条一端3cm处用铅笔划一横线(起始线),自纸条起始线以上分别形成2cm间隔区,5cm pH7缓冲区。3cm间隔区,5cm pH3缓冲区。

(3)点样及展开:取供试液3~4μl,点于起始线,边点边吹干,生、制两样品点于同一纸条。然后在pH7和pH3缓冲区内分别涂上pH7和pH3缓冲液两次,并随即悬挂于已注入展开剂(水饱和乙醚)的层析缸中,30分钟后,以上行法展开,待前沿超过pH3缓冲区,便可取出,自然干燥,喷改良碘化铋钾试剂显色,低毒或无毒的乌头次碱和乌头原碱等,仅仅自原点稍许移动或在涂pH7缓冲区停着,而乌头碱等毒性成分则越过pH7缓冲区,在pH3缓冲区停着。由此可比较生、制两种样品中毒性成分的多寡.

3.草乌(或川乌)中乌头碱的薄层层析

(1)样品液制备同纸层析项。

(2)草乌生物碱的薄层层析取硅胶G预制板(10×20cm)于105℃烘烤l小时,取出放干燥器中备用。

(3)取生、制草乌各5μ1,点于硅胶G板上,同时点乌头碱对照液lμl,以展开剂[环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(7.5:1.5:1)]上行展开,展距10cm,取出,挥去展开剂。喷洒改良碘化铋钾试液显色,由此比较生、制草乌样品斑点的大小,并计算Rf值。或用薄层扫描法测定含量。

五、注意事项

(1)煮药加水量以淹没药物为宜。煮至透心后,药汁要吸尽。煮制时开始用武火,沸腾后改用文火。

(2)纸层析时,涂布缓冲纸条力求均匀,不要超过规定的pH区域,且涂布时第一次吹干,第二次不吹干。

(3)定量分析时,力求提取完全,防止提取液外溢损失,回收溶剂,控制低温,严禁明火,滴定时注意观察终点。

六、思考题

(1)药物加辅料煮制的目的是什么?如何控制煮制的质量标准?

(2)通过乌头炮制前后的定性、定量分析可得出什么结论?你对乌头饮片的质量评价、工艺革新有何设想?

实验十四  燀法

一、实验内容

1.燀苦杏仁,燀白扁豆

2.苦杏仁燀制前后苦杏仁甙及酶的比较

二、目的要求

(1)了解燀法的目的和意义。

(2)掌握燀制的操作方法及质量要求。

(3)通过炮制前后苦杏仁甙的分析,进一步明确苦杏仁燀制的作用及原理。

三、实验器材及药品

1.燀制  电炉、铝锅,瓷盘、瓷盆等。

2.苦杏仁式测定  乳钵、250ml烧杯、水蒸气发生器、试管、滤纸、软木塞、凯氏烧瓶、冷凝装置、250ml三角烧瓶、酸式滴定管,碘化钾试液、碳酸钠试液、氢氧化钠试液、氢氧化铵试液,苦味酸(三硝基苯酚)试液及试纸、硝酸银标准液(0.1mol/L)等。

四、实验方法

(一) 燀制

1.苦杏仁  取原药材,除去杂质及硬壳,置10倍量沸水中煮5分钟,俟种皮微膨起易脱落时即捞至凉水中稍浸,捞起,搓开种皮与种仁,干燥,簸去种皮,用时捣碎。

成品性状:本品外表净白,无黑子或带皮者。

2.白扁豆  取净扁豆置沸水锅中稍煮至皮软易脱时,取出搓开种仁与皮,干燥,簸取种仁与种皮,分别入药。

成品性状:种仁黄白色。嚼之有豆腥气。衣呈不规则的卷缩状,乳白色,质脆易碎。

(二)苦杏仁中苦杏仁甙及酶的比较

1.定性分析  取生、制苦杏仁粗粉约0.2g,分别放入两支试管中,加水湿润,在试管中悬挂一条用碳酸钠试纸湿润过的苦味酸试纸,用软木塞塞紧管口,置40~50℃的水浴中放置15分钟,生品中苦杏仁受酶的作用而水解,放出氰氢酸,接触苦味酸钠试纸,发生还原反应,生成异紫酸钠显砖红色,而制品则不能显砖红色。

2.定量分析  取生品及制品分别置乳钵内捣成粗末,各取出10g,精密秤定,分别置250ml三角烧瓶中,加水100ml,放置30分钟后,用文火缓缓煮沸30分钟,然后将煎液连同药渣全部移入凯氏烧瓶中,加水使总量为150ml,趁温热加入2.0g生杏仁粗粉,密塞放置20分钟后,通水蒸气蒸馏,馏出液导入水10ml与氨试液2ml的吸收液中,待吸收瓶内溶液总量约达150ml时(取馏液2ml,加氢氧化钠试液使呈弱碱性,加苦味酸试液数滴,溶液不显红色),停止蒸馏,馏出液中加碘化钾试液2ml,用硝酸银液(0.1mol/L)缓缓滴定,至溶液显出黄白色浑浊不消失即为终点。另以生苦杏仁粗末2g,置凯氏烧瓶中,加温水150ml,放置20分钟,通过蒸气蒸馏,并按上法滴定,以此作为空白对照,将实验结果减去空白量即为实际耗用硝酸银量,计算百分含量。每1ml的硝酸银液(0.1mol/L)相当于91.48mg的苦杏仁甙(C20H27NO11)。

五、注意事项

(1)燀制时一定要水沸后投药,并应控制适宜的水量和时间。

(2)苦杏仁定量实验时,整个蒸馏装置应密闭。蒸馏时防止爆沸及倒吸。凡与蒸馏液接触的仪器应用蒸馏水冲净。滴定时应避光,并注意终点观察。

六、思考题

(1)苦杏仁、白扁豆燀制的目的是什么?

(2)苦杏仁定性、定量的原理是什么?写出各自的反应方程式。

(3)苦杏仁定量实验过程中应注意什么?道理何在?

实验十五  复制法

一、实验内容

1.制半夏、天南星

2.半夏炮制前后刺激性比较

二、目的要求

(1)明确复制法的目的意义。

(2)掌握半夏、南星的炮制方法及质量标准。

三、实验器材及药品

1.复制  瓷盘;瓷盆、筛子、刀、量筒、烧杯、电炉、玻璃棒;石灰、甘草,明矾等。

2.刺激性实验  烧杯、量杯、乳钵、滴管、兔盒、洗瓶、200目筛,家兔、生理盐水等。

四、实验方法

(一)复制法

1.半夏

(1)清半夏  取净半夏,大小分开,用8%白矾溶液浸泡,至内无干心,口尝微有麻舌感,取出,洗净,切厚片,干燥。筛去碎屑。

半夏每100kg,用白矾20kg。

(2)姜半夏  取净半夏,大小分开,用水泡至内无干心时,另取生姜切片煎汤,加白矾与半夏共煮透,取出,晾至半干,切薄片,干燥。筛去碎屑。

半夏每100kg,用生姜25kg,白矾12.5kg。

(3)法半夏  取净半夏,大小分开,用水浸泡至内无干心,去水,加入甘草—石灰液(取甘草加适量水煎2次,合并煎液,倒入适量水制成的石灰液中)浸泡,每日搅拌1~2次,并保持pHl2以上。至口尝微有麻舌感、切面黄色均匀为度,取出,洗净,阴干或烘干。

半夏每100kg,用甘草15kg,生石灰10kg。

成品性状:清半夏为白色片状,质硬而脆,味微辣并涩。姜半夏为淡黄色片,质硬而脆,味辛辣。法半夏为黄色或淡黄色较为均匀的颗粒,质疏松,味甘淡。

2.制南星  取净天南星,按大小分别用水浸泡,每日换水2~3次,如起白沫时,换水后加白矾(天南星每100kg,加白矾2kg),泡1日后,再进行换水。至切开口尝微有麻舌感时取出。将生姜片、白矾置锅内加适量水煮沸后,倒入天南星共煮至内无干心时取出,除去姜片,晾至4~6成干,切薄片,干燥。筛去碎屑。

天南星每lOOkg,用生姜、白矾各12.5kg。

成品性状,本品为黄白色或淡棕色薄片,质脆易碎,味涩微麻。.

(二)刺激性试验

(1)取清半夏少许,咀嚼1分钟,放于舌尖前l/3处,观察什么时候出现麻木感?什么时候消失?再以同样方法比较生半夏的麻辣感。微有麻辣感是指取药材100~150mg,在口内咀嚼1分钟,放于舌前1/3处,约经2~3分钟出现麻木感,持续20~30分钟逐渐消失。

(2)取生半夏和清半夏粉末(200目)各2g,分别用生理盐水研磨,使成20%混悬液,选取体重2~4kg家兔,要求双眼无红肿,无溃疡者作试验。固定家兔后,提起上、下眼皮,使成三角形,左右两眼分别滴入生半夏混悬液和清半夏混悬液各0.2ml,轻轻合闭上、下眼睑,注意不要使药液溢出,使药液与整个眼结膜充分接触,4分钟后,立即用40ml生理盐水冲洗,1小时后比较眼结膜的变化情况,并根据下列划分标准进行记录:“+”仅于上眼睑或下眼睑或上下眼睑出现小水泡。“++”同上,但水泡较大,更为明显。“+++”上下眼睑结膜有明显水肿,眼睑轻度外翻。“-”上、下眼睑与未实验前一样,无明显变化。

五、注意事项

(1)漂泡时间的长短应根据药物的质地、大小及季节来决定。生天南星、生半夏有毒,应注意安全。

(2)兔眼实验时,药液在滴入两眼前要充分混匀,眼结膜中的药粉,用生理盐水冲洗时,各组所用生理盐水应尽量一致,以便实验结果比较。

六、思考题

(1)南星、半夏的炮制目的及临床作用是什么?炮制过程中所加各种辅料的作用是什么?

(2)家兔眼刺激实验结果能说明什么?能否用其解释半夏炮制的全部作用?

实验十六  发酵、发芽法

一、实验内容

1.制备六神曲、淡豆豉。

2.制备大麦芽、大豆黄卷。

二、目的要求

(1)明确发酵、发芽的目的意义,了解影响发酵、发芽的因素及其药性变化。

(2)掌握发酵、发芽的程度及质量标准,辅料的处理及药物的制作方法。

三、工具设备

瓷盆、瓷盘、电炉、锅、锅铲、筛子、竹匾、刀,台秤、模具等。

四、实验方法

(一)发酵法

1.六神曲

(1)处方:面粉40g,麦麸60g,杏仁49,赤小豆4g,鲜青蒿、鲜苍耳草、鲜辣蓼各79(干者用1/3)。

(2)制法:将杏仁和赤小豆碾成粉末(或将杏仁碾成泥状,赤小豆煮烂)与面粉,麦麸混匀,再将鲜青蒿等用适量水煎汤(占原料量25%~30%),将汤液陆续加入面粉中,揉搓成粗颗粒状,以手握能成团,掷之即散为度。然后置木模中或用纱布包裹压成圆形或方形块,再用粗纸(或鲜苘麻叶)包严,置木箱或竹匾中,品字排列,上面覆盖鲜青蒿或湿麻袋等物保温,一般室温在30~37℃,相对湿度70%~80%之间,经4~6天即能发酵,待表面生出黄白色霉衣时,取出,除去包裹物,切成小方块,干燥。

成品性状:本品为灰黄色的块,表面粗糙,内部生有斑点,质地较硬,气味芳香,无霉气。

2.淡豆豉  取桑叶、青蒿加水煎汤,过滤,取汤与洗净的大豆拌匀,待汤被吸尽,置容器内蒸透,取出,略晾,再置容器内,上盖煎过的桑叶、青蒿药渣,闷至发酵生黄衣为度,取出,除去药渣,洗净,置容器内再闷15~20天,至充分发酵,香气溢出时,取出,略蒸,干燥。

大豆每lOOkg,用桑叶、青蒿各7kg。

成品性状:本品呈灰褐色,有黄衣。气香,味甘淡。

(二)发芽法

1.麦芽取成熟饱满的新鲜净大麦,用水浸泡至含水量达42%~45%时,捞出,置竹制或其他漏水容器内,用湿布覆盖,每日淋水2~3次,保持湿润,待芽长至0.5cm时,取出,干燥。

成品性状:本品发芽率应在85%以上,呈黄白色,有芽和须根,内含粉质,芽长0.5cm左右。

2.大豆黄卷  取成熟饱满的大豆,簸净,用清水浸泡6~8小时,捞出,置竹制或其他漏水容器内,每日淋水2~3次,保持湿润,待芽长至0.5~1cm时,取出,干燥。

成品性状:本品发芽率应在85%以上,为带芽的黄豆或黑豆,芽黄色,卷曲。

五、注意事项

(1)发酵、发芽过程中均要保证一定温度和湿度,发酵法制备药物宜在夏季进行。

(2)要勤检查,防止发酵过度或芽长得过长。

(3)麦芽、大豆黄卷等芽长至要求时,一定要及时干燥,防止芽长或变绿。

六、思考题

(1)发酵、发芽为什么要求一定的温、湿度?什么条件最好?

(2)根据实验室的制备工艺,如何设计工业生产?

实验十七  制霜法及巴豆霜的含油量测定

一、实验内容

1.制备巴豆霜、西瓜霜。

2.巴豆制霜前后巴豆油的含量测定。

二、目的要求

(1)了解制霜的目的和意义。掌握制霜的操作方法及质量标准。

(2)了解巴豆霜中巴豆油含量与巴豆霜质量关系。明确巴豆制霜的炮制原理。

三、实验器材及药品

1.制霜  乳钵、铜筛、草纸、压榨器、蒸锅、电炉、瓦罐、毛刷,芒硝等。

2.巴豆油含量测定  索氏提取器、秤量瓶、水浴锅、天平、滤纸、乳钵、蒸发皿、量筒;乙醚、无水硫酸钠等。

四、实验方法

(一)制霜

1.巴豆霜  取净巴豆仁,碾成泥状,里层用纸,外层用布包严,蒸热,用压榨器榨去油,再蒸再压,如此反复几次,至药物松散成粉末,不再粘结成饼为度。少量者,可将巴豆仁碾碎后,用数层粗纸包裹,置电热板上烘热,压榨去油,换纸后再烘再榨,如此反复数次,至纸上不再出现油痕,药物呈松散粉末不再粘结成饼为度。

成品性状:本品含油量应为18%~20%,呈暗黄色粉末,性滞腻,松散微显油性。味辛辣。

2.西瓜霜  取新鲜西瓜切碎,放入不带釉的瓦罐内,一层西瓜、一层芒硝,将口封严,悬挂于阴凉通风处,约10~15天即自瓦罐外面析出白色结晶物,随析随用毛刷收集,至无结晶析出为止。

西瓜每100kg,用芒硝15kg。

成品性状:本品为白色结晶性粉末,味微咸。

(二)巴豆及巴豆霜的含油量测定

    精密称取巴豆和巴豆霜约5g,装入滤纸筒内,上下均塞脱脂棉,置干燥的索氏提取器中,由提取管上装入无水乙醚120ml,联接冷凝装置,于恒温水浴提取2.5~3小时,水浴温度应控制在50℃左右,巴豆油是否提取完全,按下法检查。

    从提取管中吸取10滴乙醚提取液于表面皿上,置水浴锅上挥尽乙醚,然后加入4~5粒无水Na2SO4,置电炉上加热,若无丙烯醛嗅味,或乙醚提取液于白色滤纸上,使乙醚挥尽,若无油迹,则为提尽。

    利用原装置加热,回收乙醚,然后将烧瓶中的提取液倒入预先洗净,在100℃干燥而精密称重的蒸发皿中,并用少量无水乙醚洗净烧瓶,一并加入蒸发皿中,在水浴上徐徐蒸发,挥尽乙醚,然后置烘箱中,100℃干燥1小时取出,移入干燥器中冷却30分钟,精密秤定,计算巴豆油的百分含量。

巴豆油百分含量=巴豆油重/样品重×100%

五、注意事项

(1)制备西瓜霜应选在秋季凉爽有风时进行。瓦罐不可带釉。析出的霜应及时扫净。

(2)制备巴豆霜要注意劳动保护,应带口罩、手套,实验用具应及时洗刷干净。

(3)加入乙醚量不得超过烧瓶的2/3。挥发乙醚时,水浴温度以40℃为宜,温度太高,易溢出。必须将乙醚完全挥尽后,才能入烘箱内。

六、思考题

(1)巴豆有哪些制霜方法?其优缺点是什么?如何改进?

(2)巴豆霜的质量由哪些方面进行控制?

实验十八  煨法及水飞法

一、实验内容

1.面裹煨:肉豆蔻。

2.纸煨:木香。

3.麦麸煨:葛根。

4.水飞:朱砂、炉甘石。

二、目的要求

(1)明确煨法的目的意义及对药性的影响。掌握煨法的操作方法,注意事项及质量要求。

(2)明确水飞的目的意义。掌握水飞朱砂、炉甘石的操作方法、注意事项及质量要求。

三、工具设备

1.煨制  电炉、锅、锅铲、铁筛、吸油纸、固定木夹、绳子等。

2.水飞  乳钵、磁铁、烧杯、量筒等。

四、实验方法

(一)煨法

1.肉豆蔻  取面粉加水适量混合均匀成适宜的团块,再压成薄片,将肉豆蔻逐个包裹或将肉豆蔻表面用水湿润,如水泛丸法包裹面粉,再湿润再包裹至3~4层,晾至半干。投入已炒热的滑石粉锅内,适当翻动,至面皮呈焦黄色时取出。筛去滑石粉,剥去面皮。肉豆蔻每100kg,用面粉50kg。

成品性状:本品表面呈棕色,断面大理石样花纹不明显,质轻油润。香气较生品更浓,味辛辣。

2.木香  取未干燥的木香片平铺于吸油纸上,一层木香一层纸,如此间隔平铺数层,上下用平坦木板夹住,以绳捆扎结实,使木香与纸贴紧,放于温度较高的地方,使油渗于纸上,重复操作至纸上无油迹时,取出木香,放凉。

成品性状:本品颜色加深,香气明显减弱,含油量降低。

3.葛根  取麦麸撒在热锅中加热,俟冒烟时,加入葛根片,缓缓拌炒至葛根片呈焦黄色,取出,筛去焦麸,放凉。

葛根每100kg,用麦麸30kg。

成品性状,本品呈深黄色,气微香。

(二)水飞

1.朱砂  取粗朱砂粉,用磁铁吸尽铁屑,置乳钵内,加适量清水,研磨成糊状,至手捻细腻无声时,加多量清水,使成红色混悬液,稍停,即倾出上层混悬液。下沉的粗粉如上法继续研磨,如此反复数次,除去杂质,合并混悬液,静置后分取沉淀,晾干,研散。

成品性状:本品为朱红色之极细粉。味淡。

2.炉甘石同朱砂。

成品性状;本品为灰白色或红棕色的极细粉,质轻松。

五、注意事项

(1)煨制时火力不宜过大,以便油质徐徐渗入辅料内。

(2)水飞过程中,开始研磨时可稍加些水,防止研时药物飞扬,但水不可太多,否则不利研磨,加水搅取混悬液时,水也不可加得太多。

六、思考题

(1)用煨法煨制药物的原理是什么?操作时应注意些什么?

(2)朱砂、炉甘石为什么要用水飞法?此法有什么优缺点?能否进一步改进?

实验十九  提净法及干馏法

一、实验内容

1.精制芒硝、紫硇砂

2.制备蛋黄油

二、目的要求

(1)了解提净及干馏法的目的意义。

(2)掌握提净及干馏法的操作方法,质量要求。

三、工具设备

电炉、漏斗、抽滤瓶、蒸发皿、烧杯、石棉网、玻棒、切刀、砧板、滤纸等.

四、实验方法

(一)提净法

1.芒硝  先将净萝卜切成薄片,置烧杯内,加适量水煎煮20分钟,将皮硝加入萝卜液中共煮,同时不断搅拌,待皮硝全部溶化后,趁热抽滤,滤液倒入烧杯中,置10℃左右使自然析出结晶,结晶完全后,捞出晶体,避风干燥,即为成品芒硝。

皮硝每100kg,用萝卜20kg。

成品性状:本品呈无色透明或半透明针状、棱柱状、长方状或不规则颗粒状结晶。味咸微苦。

2.紫硇砂  先将硇砂适当破碎,用适量沸水溶化后,用漏斗加滤布过滤,除去杂质,再将滤液倾入烧杯中,加适量米醋,置电炉上加热,至溶液表面析出结晶时,随即捞出结晶于白色吸潮纸上,凉干即成紫硇砂。

紫硇砂每100kg,用米醋50kg,水约为硇砂的2倍。

成品性状:本品呈乳白色或微带黄色的粉末状结晶。

(二)干馏法

制备蛋黄油  将鸡蛋洗净煮熟,去壳及蛋白取黄,置蒸发皿内,压碎,文火加热,并不断翻炒,待水分蒸发后再用武火继续翻炒,至蛋黄呈焦黑色,有油馏出,及时倾出即得,

成品性状:本品呈棕黑色油状液体,具青黄色荧光。

五、注意事项

(1)制芒硝、紫硇砂加水量不宜过多,以达到药物全部溶解即可,否则不易结晶。

(2)紫硇砂有腐蚀性,应忌用金属容器。

(3)制蛋黄油时,鸡蛋要新鲜,熬油时应注意火力控制,所得蛋黄油要及时装瓶贮藏。

六、思考题

(1)皮硝和硇砂为什么要精制?得率与哪些因素有关?

(2)千馏法的炮制目的是什么?蛋黄油在临床上有什么用途?